Cultivo de células madre limbares en membrana amniótica para reconstrucción de tejido corneal: una comparación de dos métodos / Limbal stem cell culture on amniotic membrane for corneal tissue reconstruction: a comparison of techniques / Cultivo de células mãe limbares em membrana amniótica para reconstrução de tecido corneano: uma comparação de dois métodos

Objetivo: Obtener un cultivo celular de células del limbus corneal en membrana amniótica como soporte por dos métodos diferentes, suspensión y explante, para obtener datos de confluencia, viabilidad y diferenciación en ambos métodos. Métodología: Muestras de LSC (limbal stem cells, por sus siglas en inglés) fueron obtenidas de 16 donantes cadavéricos. Se realizaron seis cultivos de cada muestra, 3 por el método de suspensión y 3 por el método de explante, todo por triplicado. Como control negativo se utilizó membrana amniótica sin LSCs. Las células fueron cultivadas con SHEM, 37°C, 5% CO2 y 95% de humedad. Los cultivos fueron mantenidos por 14 días con un recambio de medio cada 3 días. El día 14 los cultivos fueron analizados para evaluar viabilidad con azul de tripano, confluencia por microscopio y la diferenciación celular con Inmunohistoquímica para detectar citoqueratina 3/12. Resultados: Como resultado de los experimentos mencionados anteriormente, para los métodos de suspensión y explante, se encontró una viabilidad de 98.92% y 98.32%, una confluencia de 55.95% y 48.27%, una concentración celular de 38.83x104 células/ml y 36.484x104 celulas/ml, y una diferenciación de 22.93% y 16.55%, respectivamente. Conclusiones: Aunque éste estudio compare dos métodos, cultivos en suspensión de LSC y cultivo en explante de LSC, ambos con membrana amniótica como soporte, nosotros encontramos una pequeña diferencia en ellos. Como resultado, el cultivo en suspensión fue mejor que el explante, sin embargo los resultados no son conclusivos, por lo tanto es necesario realizar más investigaciones en este campo para lograr una conclusión con respecto al desempeño de estos dos métodos.

Objective: To grow cells on amniotic membrane corneal limbus with two different methods to assess the confluence, viability and differentiation of both.Methods: LSC samples were obtained from 16 deceased donors. Additionally, six cultures were made from each sample, 3 by LSC suspension method and 3 by LSC explant method, all in triplicate. Furthermore, AMs without oral mucosal cells were used as negative control cultures. The cells were seeded with SHEM, 37°C, 5% CO2, 95% humidity. Moreover, the cultures were maintained for 14 days and the culture medium was changed every other day or every 3 days. Also, on the 14th day, the cultures were analyzed to evaluate viability with trypan blue, confluence with microscopy and cell differentiation with immunohistochemistry to detect cytokeratin 3/12.Results: As a result of the experiments mentioned above, for suspension and explant cultures, we found a viability of 98.92% and 98.32%, a confluence of 55.95% and 48.27%, a final cellular concentration of 38.83x104 cells/ml and 36.484x104 cells/ml, and a differentiation of 22.93% and 16.55%, respectively.Conclusions: Although this study compared two methods, LSC suspension culture and LSC explant culture, both with AM as scaffold, we did find a slight difference between them. As a result, the suspension culture was better than the LSC explant culture, but the results are not conclusive. It is necessary to conduct more research in this field to reach a conclusion regarding the behavior of these two methods

Objetivo: Obter um cultivo celular de células do limbus corneano em membrana amniótica como suporte por dois métodos diferentes, suspensão e explante, para obter dados de confluência, viabilidade e diferenciação em ambos métodos. Métodos: Mostras de LSC (limbal stem cells, por suas siglas em inglês) foram obtidas de 16 doadores cadavéricos. Realizaram-se seis cultivos de cada mostra, 3 pelo método de suspensão e 3 pelo método de explante, tudo por triplicado. Como controle negativo se utilizou membrana amniótica sem LSCs. As células foram cultivadas com SHEM, 37°C, 5% CO2 e 95% de umidade. Os cultivos foram mantidos por 14 dias com uma troca de meio cada 3 dias. O dia 14 os cultivos foram analisados para avaliar viabilidade com azul de tripan, confluência por microscópio e a diferenciação celular com Imunoistoquímica para detectar citoqueratina 3/12. Resultados: Como resultado dos experimentos mencionados anteriormente, para os métodos de suspensão e explante, encontrou-se uma viabilidade de 98.92% e 98.32%, uma confluência de 55.95% e 48.27%, uma concentração celular de 38.83x104 células/ml e 36.484x104 células/ml, e uma diferenciação de 22.935% e 16.558%, respectivamente. Conclusão: Ainda que este estudo compare dois métodos, cultivos em suspensão de LSC e cultivo em explante de LSC, ambos com membrana amniótica como suporte, nós encontramos uma pequena diferença neles. Como resultado, o cultivo em suspensão foi melhor do que o explante, no entanto os resultados não são conclusivos, portanto é necessário realizar mais investigações neste campo para conseguir uma conclusão com respeito ao desempenho destes dois métodos

Ojo seco en pacientes con artritis reumatoidea / Dry eye in patientes with rheumatoid arthritis

Objetivo: evaluar la prevalencia de ojo seco en una población de pacientes con artritis reumatoidea. Métodos: estudio observacional descriptivo de corte transversal en 153 pacientes. Se evaluó la prevalencia de ojo seco mediante el test de Schirmer, tinción con rosa de bengala, tinción con fluoresceína y test de ruptura de la película lagrimal. La severidad del ojo seco se determinó mediante el Ocular Surface Disease Index (OSDI). Resultados: 92.8 por ciento de los pacientes eran mujeres. La prevalencia de ojo seco fue del 26.3 por ciento con el Test de Schirmer I, 23.7 por ciento con la Tinción de Rosa de Bengala (TRB), 52.9 por ciento con la tinción de fluoresceína (TF) y 63.5 por ciento con el test de ruptura de la película lagrimal (TRPL). En cuanto a la función visual, entre el 63 por ciento y el 75 por ciento de los pacientes con ojo seco presentaban una limitación leve de la agudeza visual (AV). Conclusiones: el ojo seco es la complicación más frecuente en pacientes con artritis reumatoidea, por lo que es importante su detección temprana y su manejo multidisciplinario. El OSDI es un complemento valioso en la evaluación de estos pacientes. Éste tiene excelente confiabilidad, validez, sensibilidad y especificidad.

Objective: to evaluate the prevalence of dry eye in a rheumatoid arthritis patient’s population. Methods: observational,descriptive and transversal study in 153 rheumatoid arthritis patients. Were assessed the prevalence of dry eye by Schirmer test, rose bengal staining, fluorescein staining and tear break up time. The severity of dry eye was evaluated by the Ocular Surface Disease Index (OSDI). Results: 92.8% of patients were female. Dry eye prevalence evaluated by Schirmer test type I was 26.3%, rose bengal staining 23.7%, fluorescein staining 52.9% and tear break up time 63.5%. In the assesment of visual function, we found mildvisual impairment between 63% and 75% of dry eye patients.Conclusions: dry eye is the most frecuent complication in rheumatoid arthritis patients; hence, it is important early detection and multidisciplinary approach. The OSDI is a valuable complement in the valoration of these patients. It has excellent reliability,validity, sensitivity and specificity.